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我们发现，灵芝多糖BN3A，BN3B和BN3C（0.05～1μg/ml）均可显著增加C57BL/6j小鼠脾细胞在ConA存在条件下的IL—2产生，并可部分地拮抗环孢霉素A和氢化可的松对小鼠脾细胞产生IL—2的抑制作用。与3月龄小鼠比较，19月龄小鼠脾细胞IL—2产生减少17.6%～20.3%，此三种多糖均可使之恢复至3月龄小鼠的正常水平。
在混合淋巴细胞培养中，T辅助细胞（Th）受到同种异型抗原刺激后，在巨噬细胞分泌的IL—1协同下，发生增殖反应并合成分泌IL—2。在反应体系中加入终浓度为200μg/ml的GL—B，其作用呈双向反应。即在培养的前24h，GL—B可促进脾细胞合成分泌IL—2，24h以后则逐渐减少合成分泌IL—2。当固定培养时间为12h，改变GL—B的浓度，则可见GL—B呈浓度依赖性地促进脾细胞合成分泌IL—2（表7-5）。由于GL—B对IL—2依赖株HT2细胞以及同种异型抗原或ConA活化的脾细胞均无促增殖作用，故我们认为GL—B不能促进活化细胞的IL—2受体表达。
表7-5
灵芝多糖GL—B对小鼠混合淋巴细胞培养上清液
中白细胞介素质2（IL—2）活性的影响
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组别
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浓度（μg/ml）
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IL-2活性（dpm）
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对照
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- |
2044±167
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GL-B |
25 |
2386±208*
|
|
GL-B |
50 |
2930±125***
|
|
GL-B |
100 |
3044±192***
|
|
GL-B |
200 |
3607±339***
|
x -
±s,n=6,*P<0.05, ***P<0.001与对照比较。
最近，我们证实，未纯化的小鼠脾细胞在体外培养时可发生自发性增殖，即自身混合淋巴细胞培养反应（A
MLR），GL—B亦可显著促进这种反应。而更为有意义的是，24月龄老年小鼠的未纯化脾细胞的自发性增殖和IL—2分泌均较3月龄年轻小鼠显著减少，而GL—B则可剂量依赖性地使之逐渐恢复（表7-6）。
表7-6 灵芝多糖GL—B对老年小鼠脾细胞自发增殖和
白细胞介素质2（IL—2）产生的影响
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组别
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鼠龄
（月）
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浓度
（μg/ml）
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[3H]TdR摄取×10-3
（dpm）
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IL-2活性×10-3
（dpm）
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年轻对照
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3 |
- |
24.8±4.7
|
8.3±1.4
|
|
老年对照
|
24 |
- |
18.0±3.4+
|
5.8±1.0+
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GL-B |
24 |
50 |
22.1±2.7*
|
7.3±1.2*
|
|
GL-B |
24 |
100 |
24.9±3.8**
|
8.2±1.0**
|
|
GL-B |
24 |
200 |
26.4±2.4***
|
9.0±1.0***
|
x -
±s,n=6,+P<0.001与年轻对照比较,*P<0.05，**P<0.01,***P<0.001与老年对照比较。
我们还发现，GL—B与小鼠腹腔渗出细胞（主要为巨噬细胞）共同培养24h后，上清液和腹腔渗出细胞内IL—1明显增加，说明GL—B可促进腹腔渗出细胞合成和分泌IL—1（表7-7）。
表7-7
灵芝多糖GL—B对小鼠腹腔渗出细胞合成和分泌白细胞介素质1（IL—1）的影响
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组别
|
浓度
（μg/ml）
|
IL-1活性（dpm）
|
|
上清液
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细胞内
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|
对照
|
- |
9328±752
|
17805±1893
|
|
GL-B |
50 |
12290±1176***
|
18641±2042
|
|
GL-B |
100 |
15046±1645***
|
20908±2122*
|
|
GL-B |
200 |
16759±2786***
|
23218±1530***
|
x -
±s,n=6,*P<0.05，***P<0.001与对照比较。
最近灵芝，我们用Northern印迹转移杂交法观察GL—B对小鼠脾细胞内细胞因子和原癌基因mRNA表达的影响。结果证明，给小鼠灌胃GL—B（100mg/ml）7d，可明显促进脾细胞中细胞因子IL—2、IL—6、肿瘤坏死因（TNF）和原癌基因C-myc的mRNA表达，使表达量增加（表7-8）。这一结果在分子水平进一步证实了灵芝多糖的免疫调节作用。
表7-8 GL—B对小鼠脾细胞中IL—2、IL—6、TNF和
C-myc mRNA表达的影响
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观察指标
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组别
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剂量(mg/kg, ig×d)
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mRNA水平（%）
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IL-2 |
对照
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- |
100.00±1.45
|
|
GL-B |
100×7 |
166.69±7.26***
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|
IL-6 |
对照
|
- |
100.00±12.28
|
|
GL-B |
100×7 |
195.36±69.40*
|
|
TNF |
对照
|
- |
100.00±16.95
|
|
GL-B |
100×7 |
183.09±7.82***
|
|
C-myc |
对照
|
- |
100.00±7.58
|
|
GL-B |
100×7 |
149.50±27.43*
|
x -
±s,n=4,*P<0.05，***P<0.001与对照组比较。 |
